在我們進行相應的蛋白制備工作時，表達成功可以說是至關重要的，但是一些細節(jié)方面的工作如果做得好的話，下游實驗中應用起來會變得更方便。不僅僅能提升蛋白的水溶性，而且可以在極大程度上節(jié)約時間。具體操作，普健生物在下面和大家一一道來。

　　選擇正確的標簽可以說是一項艱巨的任務，因為合適的標簽不僅能幫我們獲得可溶性蛋白，而且能夠方便我們純化的方案，且不會對后續(xù)的實驗造成影響。在這里，我們唯一需要擔心的事情就是那個標簽有助于目標蛋白的溶解、表達及純化，因為標簽本身是可以切除的，所以，不用擔心它會干擾到蛋白。

　　硬性蛋白可溶性的三個關鍵參數(shù)：

　　IPTG濃度

　　在不同濃度下，蛋白的特性是不一樣的。但是我們需要注意，不要改變細胞中蛋白的折疊功能。在日常實驗中，我們可以考慮多嘗試幾個不同的濃度，選擇一個最高可溶性蛋白的產(chǎn)量;

　　溫度

　　偶爾我們在37度的典型溫度下，通過生長和誘導分離的方式來分離蛋白。當然了，我們也可以試試在較低溫度下進行增強，比如嘗試30度、25度、18度等溫度下進行誘導;

　　誘導時間

　　誘導時間并不是說越長越好，因為宿主細胞會對蛋白會造成一定的降解，毒蛋白更甚。所以，在誘導期間，我們需要隔幾個小時進行取樣，并檢測蛋白的表達情況。一般來說，37度時4小時最佳，30度5-6小時最佳，25度情況下可以允許過夜;

　　當然了，在正式投入使用之前，我們可以對其進行預實驗，通過各種不同的實驗進行測試，選擇一種最合適的方式來投入到后期的實驗中。當各種方法都無法達到預期時，我們可以考慮只表達一部分蛋白，或者選擇不同的表達系統(tǒng)來進行表達，最后甚至可以考慮采用調整各種變性條件下的純化?？傊?，無論用什么辦法，達到自己的要求即可。更多蛋白表達方面的知識，敬請關注普健生物。