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蛋白純化的操作原理及其注意事項有哪些?

發(fā)表時間:2023-08-25 訪問次數(shù):777

  蛋白制備完成后,我們需要對其進行純化以便于提升其各方面的性質(zhì)。那么,如何進行蛋白純化呢?一般來說,通過分子的大小、蛋白性質(zhì)以及外部環(huán)境等方面的不同,對蛋白進行純化。下面,普健生物具體和大家聊聊有關(guān)抗體純化的常用原理。

  1、分子大小

  對于不同的蛋白來說,其分子大小也是各不相同的。所以,我們可以結(jié)合不同分子的大小,通過透析、超濾、離心分離等一系列的手段進行蛋白純化操作;

  2、分子形狀

  蛋白分子在離心通過溶液時,在通過膜、凝膠等填充材料時,都會受到分子影響。所以,對于不同形狀的蛋白分子來說,可以利用這個方式來進行純化;

  3、蛋白溶解度

  影響到蛋白溶解度的外界因素有很多,比如PH值、離子強度、溫度等,都會在一定程度上影響到蛋白的溶解度。所以,通過調(diào)節(jié)PH值、溫度等一系列的外界環(huán)境,提升蛋白濃度;

  4、疏水性

  對于不同的蛋白來說,其親疏水性是各不相同的,而后通過調(diào)整鹽水溶液濃度來析出蛋白;

  5、蛋白穩(wěn)定性

  通過對熱穩(wěn)定性以及酶解穩(wěn)定性等方面的調(diào)整,從而對蛋白進行純化;

  蛋白純化過程中的常見問題有哪些?

  1、層析柱的壽命有多久?填料的使用次數(shù)不同和條件有異,操作過程一定要規(guī)范,就能夠保證層析柱狀態(tài)最佳;

  2、柱子堵了、超壓如何處理?將柱子寫下來,結(jié)合說明書進行相關(guān)操作;

  3、如何去除核酸雜質(zhì)?核酸帶浮點,可以通過陽離子柱上流,從而有效去除核酸;

  4、柱子進氣泡了怎么辦?一般來說是因為溫度變化,我們可以用離子水或乙醇反響高速沖洗;

  5、柱子有色素如何去除?結(jié)合填料的耐受情況,優(yōu)先選擇NaOH進行清洗,也可以使用有機溶劑清洗,在嘗試酸,如果依然去除不掉,也可以選擇定期更換填料;

  總的來說,蛋白純化的操作相對來說也沒那么困難,結(jié)合蛋白特性,在結(jié)合相關(guān)文獻,選擇最合適的蛋白純化方法。在純化的過程中,做好相應(yīng)的細節(jié)過程,這樣才能獲得更加優(yōu)質(zhì)的蛋白產(chǎn)品。普健生物專業(yè)為您提供蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。

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